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论文 | 一种基于铁蛋白的 Eg95 纳米颗粒疫苗辅以 pCpG 在小鼠模型中引发针对囊性棘球蚴病的强大免疫反应

来源:

International Journal of Nanomedicine

收录:Dovepress

原著:Xintao Gao等

转载:CATIZ人畜共患病防控科技创新院

一种基于铁蛋白的 Eg95 纳米颗粒疫苗辅以 pCpG 在小鼠模型中引发针对囊性棘球蚴病的强大免疫反应


2025年1月8日,Xintao Gao等作为原著作者,在《Dovepress》发表了题为“A Ferritin-Based Eg95 Nanoparticle Vaccine Adjuvanted with pCpG Eliciting Robust Immune Responses Against Cystic Echinococcosis in Mice Model”的研究论文。


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该研究揭示铁蛋白-CpG 杂交是一种很有前途的联合佐剂,可以升级传统的 Quil-A,这种基于联合佐剂的纳米疫苗具有良好的潜力,可以作为实际 CE 控制的商业疫苗的替代品。

图形摘要


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研究目的


本研究旨在采用一种由递送系统和免疫增强剂组成的新型佐剂,并评估其对 Eg95 抗原的佐剂作用,从而开发一种安全且具有成本效益的针对该疾病的新型疫苗。


研究方法


制备基于铁蛋白的 Eg95 纳米颗粒抗原,然后与含有 TLR9 激动剂 CpG 的质粒混合,制备新型纳米疫苗。在体外和体内评估了疫苗的安全性和有效性。


研究结果


 纳米疫苗诱导了有效且持久的 Eg95 特异性体液和细胞免疫反应,以及由较高比例的 IgG2a/IgG1 和 IFN-γ/IL-4 支持的保护性免疫相关 Th1 极化。同时,这种纳米疫苗表现出良好的安全性和经济性。


1.Eg95s-Fe 纳米颗粒的表达及测定


使用大肠杆菌 BL21 (DE3) 表达系统制备 Eg95s 纳米颗粒抗原。

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图 3基于纳米颗粒的抗原设计和表征。

2.MTS 分析的体外细胞毒性


将 RAW 264.7 、 MDBK 和 BHK-21 细胞暴露于不同浓度的佐剂 (增效剂和递送系统) 24 h。使用 MTS 测定法测定毒性特征。



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图 4MTS 测定佐剂在 RAW264.7 、 MDBK 和 BHK-21 细胞中的细胞毒性。


3.血液生化检测


收集 12 w.p.i. 的血清样品用于生化检测。体内额外的安全性评估表明,三组过量免疫的小鼠都活着健康,即使用 10 倍剂量的纳米疫苗免疫的小鼠血清生化指标也正常(补充表 1)。


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图 5基于纳米颗粒的疫苗体内安全性评价。



4.组织病理学


从不同组的动物中收集组织样本并进行组织病理学分析。如图 5E 所示,各组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾或肌肉均未观察到明显的病变或病理异常。总的来说,这些发现表明,在正常免疫剂量下,pCPG 佐剂纳米疫苗对小鼠没有毒理学作用。


5.联合佐剂 (Fe +pCpG) 增强了 Eg95 特异性总血清 IgG 抗体反应


如图 6A 所示,在特定时间点从所有测试组中收集的接种疫苗小鼠的血样中分离血清,并量化抗体反应。


6.联合佐剂促进了抗原特异性 IgG 亚类和 Th1 极化


考虑到佐剂可能会改变抗体亚类反应,并且这种影响在具有不同作用方式的佐剂之间可能有所不同,因此测量了血清中四种 IgG 同种型的滴度(图 6C-F)。


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图 6疫苗特异性的体液免疫反应


7.联合佐剂增强了细胞免疫反应并增强了 Th1 极化


为了评估佐剂对免疫激活和偏倚的影响,用 Eg95 抗原刺激从免疫小鼠中分离的脾细胞,并测定上清液中颗粒酶 B 和细胞因子的水平(图 7A)。


8.联合辅助剂增强脾细胞的 eg95 特异性增殖反应


使用 MTS 测定响应 Eg95 探索佐剂、抗原特异性 T 细胞活化和体内增殖的潜在潜在机制。


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图 7疫苗触发的细胞免疫反应


附件:

一种基于铁蛋白的 Eg95 纳米颗粒疫苗辅以 pCpG 在小鼠模型中引发针对囊性棘球蚴病的强大免疫反应.pdf